PRUEBA MOLECULAR EN CIRROSIS HEPÁTICA

Los datos de lncRNA, mRNA y miRNA utilizados en el estudio se obtuvieron de los conjuntos de datos GSE54238 y GSE63046 en la base de datos GEO. 

Procesamos el conjunto, primero se eliminó las secuencias del enlazador de todos los datos pequeños de RNA-seq y se conservó todas las secuencias originales de al menos 16 pb de longitud. A continuación, se seleccionó la calidad de secuencia de estas secuencias y se estableció la definición de bases de alta calidad (puntuación Phred ≥20) en cada lectura hasta al menos el 90% de la duración total de la lectura y una incertidumbre base de no más del 5%. Después de completar el control de calidad y la limpieza de datos de los datos brutos, se eliminó las secuencias de los ARN no codificantes, en los resultados de secuenciación de acuerdo con la información registrada en la base de datos Rfam. Luego, se alineó las secuencias filtradas y se realizó cálculos cuantitativos del miARN utilizando miRDeep2 combinado con los miARN humanos conocidos registrados en miRbase. La cuantificación de cada miARN se realizó utilizando el método TPM (transcripciones por millón):6 / cantidad total de lecturas. Finalmente, se excluyó los registros de miARN con niveles de expresión cero en todas las muestras. 

Fuente:

Gao, B., Zhang, X., Huang, Y., Yang, Z., Zhang, Y., Zhang, W., Gao, Z., Xue, D. Las redes reguladoras de genes codificantes y no codificantes subyacen a la respuesta inmune en la cirrosis hepática. (Internet) Actualizado mar 2017. (Citado 2 nov 2017). Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5371304/

ARTICULO DE PCR PARA CIRROSIS HEPÁTICA

Tema:

Estudio de la expresión del receptor LAIR-1 en macrófagos humanos. Posible implicación en el desarrollo de cirrosis hepática.

Objetivos:

• Identificar que receptor inhibidor en los fagocitos codifica el gen LAIR-1.
• Estudiar la expresión del gen LAIR-1 mediante qRT-PCR en macrófagos peritoneales obtenidos del líquido ascítico de pacientes con cirrosis hepática, y su comparación con los obtenidos para macrófagos de sangre periférica de donantes sanos, como población de referencia.

Muestra:

• Líquido ascítico
• Sangre periférica

Tipo de ácido nucleico:

ARN viral ---------RT----------ADNc

Extracción:

• Kit RNeasy
• Mini kit

Gen amplificado:

Gen LAIR-1

Tipo de PCR:

PCR en tiempo real

Pasos de PCR:

• Desnaturalización: 15 seg – 95º C
• Hibridación: 60 seg – 60º C
• Extensión: 60 seg – 60º C

Se repiten 40 ciclos.

Visualización:

EFO

Fuente:

• Fernández, M., Tapia, A., Rodríguez, J., Ruíz. A., García, P., Martínez. M. Estudio de la expresión del receptor LAIR-1 en macrófagos humanos. Posible implicación en el desarrollo de cirrosis hepática. (Internet) Actualizado: 2013. (Citado: 25 nov 2017). Disponible en: http://congresos.um.es/iiefb/iiefb2013/paper/viewFile/27511/12531 

PRUEBAS DE TAMIZAJE Y CONFIRMATORIAS DE CIRROSIS HEPÁTICA

PRUEBAS DE TAMIZAJE:

Para sospechar de cirrosis hepática en un paciente se evalúan algunos biomarcadores, como lo son ciertas proteínas que se miden en pruebas serológicas una de estas es la presencia de dos tipos de Aminotransferasas (alanina aminotransferasa y aspartato aminotransferasa) con una especificidad del 95-100% pero una sensibilidad del 45-75%, junto con otras como la fosfatasa alcalina, bilirrubina y la gammaglutamiltranspeptidasa.

Además de otras pruebas que determinan si se encuentra comprometida la función de síntesis hepática: el tiempo de protrombina por su papel en la síntesis de varios factores de coagulación y albúmina sérica, las cuales generalmente se encuentran alteradas.

Pruebas radiológicas o de imagen  también son útiles para pensar en cirrosis hepática, la ecografía es una de las más utilizadas por su facilidad y al no ser invasivas, además de permitir la observación de algún daño. Existen otras que pueden ser de tamizaje secundario como tomografía axial computarizada, resonancia magnética, ultrasonido abdominal y los rayos X.

PRUEBAS CONFIRMATORIAS

BIOPSIA DE HÍGADO

Mediante la toma de una muestra de tejido hepático para su análisis la biopsia permite con mayor precisión determinar la existencia de cirrosis hepática, a pesar de ser una intervención invasiva que tiene un considerado índice de error y que además puede poner en riesgo la vida del paciente.

En el mes de noviembre de este año se estableció  una prueba que permite diferenciar con exactitud entre hepatocarcinoma celular y cirrosis, se trata del Transductor de señal y el activador de transcripción STAT3, ya que se ha encontrado sobreexpresado en la cirrosis y a su vez se ha demostrado que sirve también para determinar la predisposición de la persona a generar un hepatocarcinoma celular. Está prueba ha resultado ser muy efectiva ya que tiene una sensibilidad del 96% y una especificidad del 95%.

REFERENCIAS:

• Susana P. Hipertransaminasemias. (Internet) Actualizado: 13 de septiembre del 2013, (Citado: 19 nov 2017). Disponible en: https://magllerandi.files.wordpress.com/2013/10/hipertrasnsaminasemias.pdf

• Chinese Medical Journal. Transductor de señal y activador de la transcripción 3 para la diferenciación del carcinoma hepatocelular de la cirrosis. (Internet) Actualizado: 10 de noviembre del 2017, (Citado: 19 nov 2017). Disponible en: http://www.cmj.org/article.asp?issn=0366-6999;year=2017;volume=130;issue=22;spage=2686;epage=2690;aulast=Li

ALTERACIÓN DE LA EPIGENÓMICA DE LA CIRROSIS

El alcohol agota la S-adenosilmetionina (SAMe), el principal donador de metilo para la metilación de ADN e histonas, altera la expresión de miARN múltiples y mediante su inducción de especies de oxígeno reactivas hepáticas promueve la acetilación de H3K9 lo que lleva a una mayor expresión de enzimas metabolizadoras de alcohol que al inducir más ROS provoca la acetilación y potencialmente el establecimiento de re-paisajismo y pre-alimentación.

Fuente:

Wilson, C., Mann, D., Borthwick, L. Reprogramación epigenética en fibrosis hepática y cáncer. ELSEVIER (Internet). 2017 (Citado 12 nov 2017). Disponible en: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0169409X17302351?via%3Dihub